产品货号：
GS0143
中文名称：
SgPfu PCR Mix(不含染料)
英文名称：
2×SgPfu PCR MasterMix(without Loading Dye)
产品规格：
20次|100次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品可用于普通PCR、RT-PCR、RAPD、PCR测序、RACE、DD-PCR以及其它PCR相关的实验室工作。2×SgPfu PCR MasterMix包括3mM MgCl2、0.2mM dNTP、0.1U/μL Pfu DNA Polymerase和2×PCR buffer。经过优化的PCR Master使大多数PCR反应都能很好的进行。PCR反应混合物的配制可在几分钟之内完成，只需加引物、模板DNA和适量的去离子水。
影响PCR反应的因素很多，即使使用经高度优化的PCR MasterMix也会遇到问题。如果发现PCR反应没有得所需产物或条带较弱，建议用试剂盒中提供的25mM MgCl2调节反应体系中的Mg2+浓度，以期获得更好的结果。
| 组分 | 20次 | 100次 |
| 2×SgPfu PCR MasterMix | 500μL | 5×500μL |
| Sterilized ddH2O | 1mL | 5×1mL |
| MgCl2(25mM) | 500μL | 1mL |
保存：-20℃
- 模板DNA准备：基因组DNA，反应体系中模板浓度推荐范围1～10μg/mL；质粒或噬菌体DNA浓度0.1～1ng/mL。
- 引物准备：引物浓度推荐范围0.05～1μM。
- 在无菌洁净的PCR管中依次加入以下溶液：
成分 用量 Sterilized ddH2O 20μL 2×HiFi-PCR Master 25μL DNA模板 1μL 上游引物(10μM) 2μL 下游引物(10μM) 2μL 终体积 50μL - 充分混匀后短暂离心。
- 加适量的矿物油，反应管置于PCR仪中进行反应。
- 对于有热盖的PCR仪可不加。
| 问题 | 分析 |
| 产量低或无PCR产物 | 模板质量差或产量低：模板完整性差；模板纯度差；模板数量少。 |
| 引物设计不完善。 | |
| PCR条件未优化：退火温度；延伸时间及温度；循环数。 | |
| 反应条件未优化：Pfu DNA Polymerase用量不够；引物数量不够； Mg2+浓度不够；反应混合物中使用dUTP或修饰的核苷酸。 | |
| 模板复杂：高GC含量；长模板。 | |
| 非特异性PCR产物 | 引物设计不完善。 |
| 配制反应混合物温度不合适。 | |
| 反应条件未优化：Mg2+浓度过高；模板用量过多。 | |
| PCR条件未优化：退火温度；加DMSO等。 |
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